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[[高效液相色谱法]](High Performance Liquid Chromatography,HPLC)又称'''高压液相色谱'''、'''高速液相色谱'''、'''高分离度液相色谱'''、'''近代柱色谱'''等,是[[色谱法]]的一个重要分支,以液体为流动相,采用高压[[输液]]系统,将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、[[缓冲液]]等流动相泵入装有固定相的色谱柱,在柱内各成分被分离后,进入检测器进行检测,从而实现对试样的分析。该方法已成为[[化学]]、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中重要的分离分析技术。 高效液相色谱是目前应用最多的色谱分析方法,高效液相色谱系统由流动相储液体瓶、[[输液泵]]、进样器、色谱柱、检测器和记录器组成,其整体组成类似于气相色谱,但是针对其流动相为液体的特点作出很多调整。高效液相色谱法的输液泵要求输液量恒定平稳;进样系统要求进样便利切换严密;由于液体流动相粘度远远高于气体,为了减低柱压高效液相色谱的色谱柱一般比较粗,长度也远小于气相色谱柱。 ==高效液相色谱法的特点== 高效液相色谱法有“三高一广一快”的特点: *高压:流动相为液体,流经色谱柱时,受到的阻力较大,为了能迅速通过色谱柱,必须对载液加高压。 *高效:分离效能高。可选择固定相和流动相以达到最佳分离效果,比工业精馏塔和气相色谱的分离效能高出许多倍。 *高灵敏度:紫外检测器可达0.01ng,进样量在uL数量级。 *应用范围广:百分以上的有机化合物可用高效液相色谱分析,特别是高沸点、大分子、强极性、热稳定性差[[化合物]]的分离分析,显示出优势。 *分析速度快、载液流速快:较经典液体色谱法速度快得多,通常分析一个样品在15~30分钟,有些样品甚至在5分钟内即可完成,一般小于1小时。 此外高效液相色谱还有色谱柱可反复使用、样品不被破坏、易回收等优点,但也有缺点,与气相色谱相比各有所长,相互补充。高效液相色谱的缺点是有“柱外效应”。在从进样到检测器之间,除了柱子以外的任何死空间(进样器、柱接头、连接管和检测池等)中,如果流动相的流型有变化,被[[分离物]]质的任何扩散和滞留都会显著地导致色谱峰的加宽,柱效率降低。高效液相色谱检测器的灵敏度不及气相色谱。 ==[[高效液相色谱仪]]== 高效液相色谱仪的结构和流程多种多样。 高效液相色谱仪一般都具备贮液器、高压泵、梯度洗提装置(用双泵)、进样器、色谱柱、检测器、恒温器、记录仪等主要部件。
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