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nick translation法,标记DNA[[探针]]. 缺口翻译法或[[切口平移]]法是实验室最常用的一种[[脱氧核糖核酸]]探针标记法。利用<i>E.coli </i>DNA[[多聚酶]]I的多种酶促活性将标记的dNTP掺入到新合成的DNA链中从而形成高比活性的均匀标记的DNA探针。线状、[[超螺旋]]及带缺口的环状双链DNA均可作为[[缺口平移]]法的模版。 基本原理: 以限量的DNase I在待标记的双链DNA的每一条链上产生若干个[[单链]]缺口;再利用<i>E.coli </i>DNA多聚酶Ⅰ的 5’-3’外切[[酶活性]]和5’-3’多聚酶活性,在缺口处的5’末端每切除一个[[核苷酸]],则在3’末端添加一个核苷酸,以修补缺口,随着缺口在DNA链上的移动,标记的核苷酸就掺入到新合成的DNA链中。 此法特点是快速、简便、标记的探针均匀、特异性高;适用于较长的双链DNA;DNA多聚酶必须是<i>E.Coli</i> DNA多聚酶的[[全酶]];DNA酶Ⅰ的浓度一定要适宜。
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缺口平移
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