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临床生物化学/血清酶定量的检测技术
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{{Hierarchy header}} 酶在正常和[[病理]][[代谢]]中起着重要作用,因此酶的测定是医学实验室的一项重要工作,在医学研究和[[医院]]常规工作中都要进行大量酶的测定。但要作好酶的测定不是一件很容易的事,因为它有很多与其它定量测定不同或独特之处,作好酶的测定除了必须掌握一般分析技术知识外,还须了解酶测定的特点、方法分类和各类方法的优缺点,然后根据各自实验室情况、研究目的和临床需要,才能设计和应用好各个具体的酶测定方法,创造性地作好酶的测定。 目前常用于酶定量测定的方法是测量酶的活性浓度,此方法并不直接测[[酶蛋白]]含量,实际上是测定酶[[催化]]反应的速度,并由此间接地推算出[[标本]]中酶浓度的高低,这是酶测定方法独特之处。 使用间接方法并不是因为该法比直接测定酶蛋白有很多优点,事实上间接方法有不少不足之处,在很大程度上采用间接法是出于无奈,因为在所测标本中酶蛋白浓度和其它[[蛋白]]相比明显偏低,例如在[[血清]]中大多数酶蛋白含量多在g/L水平,用一般化学方法从含量高达70g/L[[蛋白质]]的血清中将酶蛋白分离出来并直接测定其含量显然是很困难的。这样科学家才想到利用酶蛋白的催化特性来测定酶;微量酶蛋白可以明显加快所催化反应的速度,并在特定条件下,此反应速度(v)可和酶浓度(E)成正比例。可以下列二式表示之: v=△P/△t=k.E 此式以单位时间(t)内产生物(P)生成量表示反应速度 v=-△S/△t=k.E 此式中以[[底物]](S)减少量取代产物生成量。 以上二式是衡量测[[酶活性]]浓度方法是否准确可靠的基本标准。因为不是任何情况下酶的催化反应速度都能与酶浓度成正比例,当设计不当,所选择条件不合适时,反应速度v虽可能随酶浓度增加而加快,但不成正比例,即v≠k[E],所得结果出现误差,从表17-1可以清楚看到此问题。 方法1所测反应速度(v)和酶浓度间存在一个明显正比例关系,各标本μg/L和酶浓度间高度的一致,相反方法2各标本的U/L不能准确反应酶浓度(μg/L)间的比例关系,浓度愈高误差愈大,例如标本5酶浓度为标本1的5倍。但其反应速度结果却显示为3.5倍,在临床工作中这种误差有可能给医师诊断[[疾病]]判断病情带来困难,在科研工作中也有可能导致不恰当的结论。方法3的结果说明在标本1到标本3的酶浓度之间,测定结果是准确的,但在高浓度标本时可能导致误差,这是在实际工作中常能遇到的情况。 表17-1 三个测同一酶方法结果的比较 {| class="wikitable" | 标本 | rowspan="2" | 酶浓度(μg/L) | colspan="3" | 测定结果(U/L) |- | 方法1 | 方法2 | 方法3 | |- | 1 | 1 | 100 | 50 | 10 |- | 2 | 2 | 200 | 90 | 20 |- | 3 | 3 | 300 | 125 | 30 |- | 4 | 4 | 400 | 155 | 38 |- | 5 | 5 | 500 | 175 | 45 |} 表17-1还显示了酶活性浓度测定的另一个重要特点,即测定结果U/L的相对性,不同于用质量单位mol/L表示浓度时高度一致性,如用不同方法测5份不同浓度[[血糖]]标本。其绝对值(μmol/L)不会有太大差异。但在酶活性浓度测定中往往不存在这样高的一致性。如表17-1三个法结果可在同一方法内进行比较。而绝不能在方法间进行比较,否则会得出荒谬的结论。这是因为这些方法测的是反应速度,只能用速度单位(一单位表示每一分钟有1μmol/L反应物的变化)来间接表示酶含量的高低,而速度快慢不仅受酶含量多少影响,还与其它很多因素有关,表17-1中法之所以有这样大的结果差异,很可能是由于三种方法使用了不同种类的底物,由于酶与不同底物亲和性不一样,反应速度的绝对值(μmol min<sup>-1</sup>)出现差异是不足为奇的。 这些叙述说明了在考虑或设计酶活性浓度测定方法时,重要的是要选择好各种条件,使在尽可能宽的范围内所测的反应速率v和酶浓度E之间存在着正比例关系。 {{Hierarchy footer}} {{临床生物化学图书专题}}
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