查看“CDNA”的源代码

<div style="padding: 0 4%; line-height: 1.8; color: #1e293b; font-family: 'Helvetica Neue', Helvetica, 'PingFang SC', Arial, sans-serif; background-color: #ffffff; max-width: 1200px; margin: auto;">

    <div style="margin-bottom: 30px; border-bottom: 1.2px solid #e2e8f0; padding-bottom: 25px;">
        <p style="font-size: 1.1em; margin: 10px 0; color: #334155; text-align: justify;">
            <strong>[[互补DNA]] (Complementary DNA, cDNA)</strong> 是指在体外经过 <strong>[[逆转录酶]] (Reverse Transcriptase)</strong> 的催化作用，以单链 RNA（通常为 <strong>[[mRNA]]</strong>）为模板合成的互补双链 DNA。与天然的 <strong>[[基因组DNA]] (gDNA)</strong> 不同，cDNA 不包含 <strong>[[内含子]] (Introns)</strong> 和非编码调控序列（如启动子），仅由 <strong>[[外显子]] (Exons)</strong> 拼接而成。这一特性使得真核生物的基因能够被导入原核生物（如大肠杆菌）中进行表达，因为原核生物缺乏剪接内含子的机制。cDNA 是 <strong>[[RT-qPCR]]</strong>、<strong>[[RNA-Seq]]</strong> 建库以及基因克隆技术的核心物质基础。
        </p>
    </div>

    <div class="medical-infobox mw-collapsible mw-collapsed" style="width: 320px; float: right; margin: 0 0 25px 25px; border: 1.2px solid #bae6fd; border-radius: 12px; background-color: #ffffff; box-shadow: 0 8px 20px rgba(0,0,0,0.05); overflow: hidden;">
        
        <div style="padding: 15px; color: #1e40af; background: linear-gradient(135deg, #e0f2fe 0%, #bae6fd 100%); text-align: center; cursor: pointer;">
            <div style="font-size: 1.2em; font-weight: bold; letter-spacing: 1.2px;">互补DNA</div>
            <div style="font-size: 0.7em; opacity: 0.85; margin-top: 4px; white-space: nowrap;">Complementary DNA (cDNA) · 点击展开</div>
        </div>
        
        <div class="mw-collapsible-content">
            <div style="padding: 25px; text-align: center; background-color: #f8fafc;">
                <div style="display: inline-block; background: #ffffff; border: 1px solid #e2e8f0; border-radius: 12px; padding: 20px; box-shadow: 0 4px 10px rgba(0,0,0,0.04);">
                     <div style="width: 140px; height: 90px; background-color: #f1f5f9; display: flex; align-items: center; justify-content: center; color: #94a3b8; font-size: 0.8em; padding: 10px; text-align: center;">Conceptual Model:<br>mRNA Template $\to$ cDNA</div>
                </div>
                <div style="font-size: 0.8em; color: #64748b; margin-top: 12px; font-weight: 600;">核心特征：无内含子</div>
            </div>

            <table style="width: 100%; border-spacing: 0; border-collapse: collapse; font-size: 0.85em;">
                <tr>
                    <th style="text-align: left; padding: 8px 12px; background-color: #f1f5f9; color: #475569; border-bottom: 1px solid #e2e8f0; width: 40%;">合成模板</th>
                    <td style="padding: 8px 12px; border-bottom: 1px solid #e2e8f0; color: #0f172a;">[[mRNA]] / [[miRNA]] / 病毒RNA</td>
                </tr>
                <tr>
                    <th style="text-align: left; padding: 8px 12px; background-color: #f1f5f9; color: #475569; border-bottom: 1px solid #e2e8f0;">关键酶</th>
                    <td style="padding: 8px 12px; border-bottom: 1px solid #e2e8f0; color: #1e40af;">[[逆转录酶]] (RT)</td>
                </tr>
                <tr>
                    <th style="text-align: left; padding: 8px 12px; background-color: #f1f5f9; color: #475569; border-bottom: 1px solid #e2e8f0;">结构特点</th>
                    <td style="padding: 8px 12px; border-bottom: 1px solid #e2e8f0; color: #0f172a;">无内含子，含 [[Poly(A)]] 对应序列</td>
                </tr>
                <tr>
                    <th style="text-align: left; padding: 8px 12px; background-color: #f1f5f9; color: #475569; border-bottom: 1px solid #e2e8f0;">常用引物</th>
                    <td style="padding: 8px 12px; border-bottom: 1px solid #e2e8f0; color: #0f172a;">Oligo(dT) / 随机引物</td>
                </tr>
                <tr>
                    <th style="text-align: left; padding: 8px 12px; background-color: #f1f5f9; color: #475569; border-bottom: 1px solid #e2e8f0;">主要用途</th>
                    <td style="padding: 8px 12px; border-bottom: 1px solid #e2e8f0; color: #1e40af;">[[基因表达分析]] / 蛋白表达</td>
                </tr>
                <tr>
                    <th style="text-align: left; padding: 8px 12px; background-color: #f1f5f9; color: #475569;">存储形式</th>
                    <td style="padding: 8px 12px; color: #0f172a;">[[cDNA文库]]</td>
                </tr>
            </table>
        </div>
    </div>

    <h2 style="background: #f1f5f9; color: #0f172a; padding: 10px 18px; border-radius: 0 6px 6px 0; font-size: 1.25em; margin-top: 40px; border-left: 6px solid #0f172a; font-weight: bold;">合成原理：中心法则的逆流</h2>
    
    <p style="margin: 15px 0; text-align: justify;">
        cDNA 的合成是模拟<strong>[[逆转录病毒]]</strong>（如 HIV）复制过程的体外反应，主要包括以下步骤：
    </p>
    <ul style="padding-left: 25px; color: #334155;">
        <li style="margin-bottom: 12px;"><strong>第一链合成 (First-strand Synthesis)：</strong> 以 mRNA 为模板。利用引物（如结合 mRNA 3'端 Poly(A) 尾的 <strong>[[Oligo(dT)]]</strong> 或随机六聚体）与模板退火。<strong>[[逆转录酶]]</strong>（如 M-MLV）从 5' 到 3' 方向延伸，合成一条与 mRNA 互补的 DNA 链，形成 <strong>[[RNA-DNA杂交链]]</strong>。</li>
        <li style="margin-bottom: 12px;"><strong>RNA 降解：</strong> 利用 <strong>[[RNase H]]</strong> 活性特异性水解杂交链中的 RNA 模板，或通过碱处理降解 RNA。</li>
        <li style="margin-bottom: 12px;"><strong>第二链合成 (Second-strand Synthesis)：</strong> 以第一链 cDNA 为模板，利用 DNA 聚合酶 I 和残留的 RNA 片段（作为引物）或外源引物，合成互补的第二条 DNA 链，最终形成双链 cDNA。</li>
    </ul>

    <h2 style="background: #f1f5f9; color: #0f172a; padding: 10px 18px; border-radius: 0 6px 6px 0; font-size: 1.25em; margin-top: 40px; border-left: 6px solid #0f172a; font-weight: bold;">对比分析：cDNA vs. 基因组 DNA</h2>

    <div style="overflow-x: auto; margin: 30px auto; max-width: 95%;">
        <table style="width: 100%; border-collapse: collapse; border: 1.2px solid #cbd5e1; font-size: 0.92em; text-align: left;">
            <tr style="background-color: #f8fafc; border-bottom: 2px solid #0f172a;">
                <th style="padding: 12px; border: 1px solid #cbd5e1; color: #0f172a; width: 25%;">比较维度</th>
                <th style="padding: 12px; border: 1px solid #cbd5e1; color: #475569;">基因组 DNA (gDNA)</th>
                <th style="padding: 12px; border: 1px solid #cbd5e1; color: #1e40af;">互补 DNA (cDNA)</th>
            </tr>
            <tr>
                <td style="padding: 10px; border: 1px solid #cbd5e1; font-weight: 600;">组成成分</td>
                <td style="padding: 10px; border: 1px solid #cbd5e1;">包含<strong>[[内含子]]</strong>、外显子、启动子、增强子及非编码间隔区。</td>
                <td style="padding: 10px; border: 1px solid #cbd5e1;">仅包含<strong>[[外显子]]</strong>（编码区 CDS + UTR），无调控序列。</td>
            </tr>
            <tr>
                <td style="padding: 10px; border: 1px solid #cbd5e1; font-weight: 600;">来源</td>
                <td style="padding: 10px; border: 1px solid #cbd5e1;">直接提取自细胞核，代表生物体的遗传蓝图。</td>
                <td style="padding: 10px; border: 1px solid #cbd5e1;">由 mRNA 逆转录而来，反映特定时空的<strong>[[基因表达状态]]</strong>。</td>
            </tr>
            <tr>
                <td style="padding: 10px; border: 1px solid #cbd5e1; font-weight: 600;">表达应用</td>
                <td style="padding: 10px; border: 1px solid #cbd5e1;">真核基因若含内含子，无法直接在原核系统（细菌）中表达。</td>
                <td style="padding: 10px; border: 1px solid #cbd5e1;">可直接构建到<strong>[[表达载体]]</strong>中，利用细菌生产重组蛋白（如胰岛素）。</td>
            </tr>
        </table>
    </div>

    <h2 style="background: #f1f5f9; color: #0f172a; padding: 10px 18px; border-radius: 0 6px 6px 0; font-size: 1.25em; margin-top: 40px; border-left: 6px solid #0f172a; font-weight: bold;">应用领域：连接 RNA 与 DNA 的桥梁</h2>
    <p style="margin: 15px 0; text-align: justify;">
        cDNA 的发明彻底改变了分子生物学，使 RNA 的分析变得稳定且可操作：
    </p>
    <ul style="padding-left: 25px; color: #334155;">
        <li style="margin-bottom: 12px;"><strong>基因表达定量：</strong> <strong>[[RT-qPCR]]</strong> 是检测 mRNA 水平的金标准，用于验证基因敲除效率或筛选药物靶点。</li>
        <li style="margin-bottom: 12px;"><strong>cDNA 文库构建：</strong> 将某组织的所有 mRNA 转化为 cDNA 并插入载体，形成代表该组织转录组信息的 <strong>[[cDNA文库]]</strong>，用于筛选目的基因。</li>
        <li style="margin-bottom: 12px;"><strong>转录组测序 (RNA-Seq)：</strong> 现代 NGS 测序仪无法直接测序 RNA，必须先构建 cDNA 文库，再进行高通量测序以分析差异表达基因。</li>
        <li style="margin-bottom: 12px;"><strong>表达序列标签 (EST)：</strong> 通过对 cDNA 文库进行单次测序获得的短序列，用于快速鉴定基因转录本。</li>
    </ul>

    <h2 style="background: #f1f5f9; color: #0f172a; padding: 10px 18px; border-radius: 0 6px 6px 0; font-size: 1.25em; margin-top: 40px; border-left: 6px solid #0f172a; font-weight: bold;">关键相关概念</h2>
    <div style="background-color: #f8fafc; border: 1px solid #e2e8f0; border-radius: 8px; padding: 15px; margin: 20px 0;">
        <ul style="margin: 0; padding-left: 20px; color: #334155;">
            <li style="margin-bottom: 8px;"><strong>[[RACE技术]] (Rapid Amplification of cDNA Ends)：</strong> 基于 cDNA 末端扩增获得全长基因序列的方法。</li>
            <li style="margin-bottom: 8px;"><strong>[[逆转录酶]] (Reverse Transcriptase)：</strong> 依赖 RNA 的 DNA 聚合酶，具有 RNase H 活性，来源于逆转录病毒（如 AMV, M-MLV）。</li>
            <li style="margin-bottom: 8px;"><strong>[[开放阅读框]] (ORF)：</strong> cDNA 中从起始密码子到终止密码子的连续编码序列。</li>
            <li style="margin-bottom: 8px;"><strong>[[剪接变体]] (Splice Variants)：</strong> 同一基因的前体 mRNA 经不同剪接方式形成的成熟 mRNA，对应的 cDNA 序列也不同。</li>
        </ul>
    </div>

    <div style="font-size: 0.92em; line-height: 1.6; color: #1e293b; margin-top: 50px; border-top: 2.2px solid #0f172a; padding: 15px 25px; background-color: #f8fafc; border-radius: 0 0 10px 10px;">
        <span style="color: #0f172a; font-weight: bold; font-size: 1.05em; display: inline-block; margin-bottom: 15px;">学术参考文献与权威点评 [Academic Review]</span>
        
        <p style="margin: 12px 0; border-bottom: 1px solid #e2e8f0; padding-bottom: 10px;">
            [1] <strong>Baltimore D. (1970).</strong> <em>RNA-dependent DNA polymerase in virions of RNA tumour viruses.</em> <strong>[[Nature]]</strong>. 226(5252):1209-1211.<br>
            <span style="color: #475569;">[权威点评]：诺贝尔奖级发现，David Baltimore 独立发现了逆转录酶，打破了中心法则“DNA到RNA”的单向流动定论，为 cDNA 技术奠定了理论基础。</span>
        </p>
        
        <p style="margin: 12px 0; border-bottom: 1px solid #e2e8f0; padding-bottom: 10px;">
            [2] <strong>Temin HM, Mizutani S. (1970).</strong> <em>RNA-dependent DNA polymerase in virions of Rous sarcoma virus.</em> <strong>[[Nature]]</strong>. 226(5252):1211-1213.<br>
            <span style="color: #475569;">[学术点评]：与 Baltimore 同期发表的里程碑论文，证实了 RNA 肿瘤病毒中存在逆转录酶，开启了反转录病毒学及 cDNA 克隆时代。</span>
        </p>

        <p style="margin: 12px 0; border-bottom: 1px solid #e2e8f0; padding-bottom: 10px;">
            [3] <strong>Okayama H, Berg P. (1982).</strong> <em>High-efficiency cloning of full-length cDNA.</em> <strong>[[Molecular and Cellular Biology]]</strong>. 2(2):161-170.<br>
            <span style="color: #475569;">[学术点评]：开发了经典的 Okayama-Berg 载体系统，极大地提高了全长 cDNA 的克隆效率，使建立高质量 cDNA 文库成为可能。</span>
        </p>
    </div>

    <div style="margin: 40px 0; border: 1px solid #e2e8f0; border-radius: 8px; overflow: hidden; font-family: 'Helvetica Neue', Arial, sans-serif; font-size: 0.9em;">
        <div style="background-color: #eff6ff; color: #1e40af; padding: 8px 15px; font-weight: bold; text-align: center; border-bottom: 1px solid #dbeafe;">
            cDNA · 知识图谱
        </div>
        <table style="width: 100%; border-collapse: collapse; background-color: #ffffff;">
            <tr style="border-bottom: 1px solid #f1f5f9;">
                <td style="width: 95px; background-color: #f8fafc; color: #334155; font-weight: 600; padding: 10px 12px; text-align: right; vertical-align: middle; white-space: nowrap;">上游原料</td>
                <td style="padding: 10px 15px; color: #334155;">[[mRNA]]•[[逆转录酶]]•[[dNTPs]]•[[RNase Inhibitor]]</td>
            </tr>
            <tr style="border-bottom: 1px solid #f1f5f9;">
                <td style="width: 95px; background-color: #f8fafc; color: #334155; font-weight: 600; padding: 10px 12px; text-align: right; vertical-align: middle; white-space: nowrap;">引物策略</td>
                <td style="padding: 10px 15px; color: #334155;">[[Oligo(dT)]](全长)•[[随机引物]](高产)•[[特异性引物]](高敏)</td>
            </tr>
            <tr style="border-bottom: 1px solid #f1f5f9;">
                <td style="width: 95px; background-color: #f8fafc; color: #334155; font-weight: 600; padding: 10px 12px; text-align: right; vertical-align: middle; white-space: nowrap;">下游技术</td>
                <td style="padding: 10px 15px; color: #334155;">[[RT-qPCR]]•[[RNA-Seq]]•[[cDNA微阵列]]•[[双杂交系统]]</td>
            </tr>
            <tr>
                <td style="width: 95px; background-color: #f8fafc; color: #334155; font-weight: 600; padding: 10px 12px; text-align: right; vertical-align: middle; white-space: nowrap;">相关病毒</td>
                <td style="padding: 10px 15px; color: #334155;">[[HIV]]•[[乙肝病毒(HBV)]]•[[Rous肉瘤病毒]]•[[逆转录转座子]]</td>
            </tr>
        </table>
    </div>

</div>