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组织学/一般光学显微镜术
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{{Hierarchy header}} 应用一般[[光学显微镜]](简称光镜)观察[[组织切片]]是[[组织学]]研究的最基本方法。取动物或人体的新鲜组织块,先用固定剂(fixative)固定(fixation),使组织中的[[蛋白质]]迅速凝固,防止[[细胞]][[自溶]]和组织腐败。常用的固定剂如酒精、[[甲醛]]、[[醋酸]]、[[苦味酸]]、[[四氧化锇]]等,一般常将几种固定剂配制成混合固定液,以抵消或减弱单种固定剂对组织的收缩或[[膨胀]]等缺点,达到更好固定效果。固定后的组织块(约3~5mm<sup>3</sup>大小)用[[石蜡]]、[[火棉胶]]或树脂等包埋(embedding)成硬块,以[[切片机]](microtome)切成5~10μm厚的组织切片(tissue section),切片贴在[[载玻片]]上经脱蜡等步骤后进行[[染色]]。组织块也可立即投入液氮(-196℃)内快速冻结,用恒冷箱切片机(cryostat)制成[[冷冻]]切片(frozen section),这种方法制片迅速,细胞内[[酶活性]]保存较好,常用于酶[[组织化学]]染色。[[血细胞]]和分离培养的细胞可直接涂在玻片上,制成[[涂片]](smear)。[[疏松结缔组织]]和[[肠系膜]]等软组织可撕成薄片铺在玻片上(铺片),牙和骨等坚硬组织可磨成薄片(磨片)。组织切片等[[标本]]经染色、透明后,以[[封固]]剂和盖片封固,即可长期保存,镜下观察。 {{图片|gunk9qiy.jpg| 坚牢绿(酸性染料)与[[亚甲蓝]](碱性染料)的[[化学]]结构及其染色反应示意}} 图1-1 坚牢绿(酸性染料)与亚甲蓝(碱性染料)的化学结构及其染色反应示意 染色(staining)是用染料使组织切片着色,便于镜下观察。天然和人工合成的染料甚多,它们都是含[[发色团]]的有机化合物,当染料具有[[助色团]]成为盐类物质,即可溶解于水并具电荷,与组织有[[亲合力]],使组织着色。含氨基(-NH<sub>2</sub>)、[[二甲氨基]]〔-N(CH<sub>3</sub>)<sub>2</sub>〕等碱性助色团的染料,称碱性染料(basic dye),它的[[盐溶]]液具阳电荷;含羧基(-COOH)、[[羟基]](-OH)或磺基(-SO<sub>3</sub>H)等酸性助色团的染料,称酸性染料(acid dye),它的溶液具阴电荷(图1-1)。组织的染色原理一般认为基于化学结合或[[物理]]吸附作用。细胞和组织的酸性物质或结构与碱性染料亲合力强者,称[[嗜碱性]](basophilia);而碱性物质或结构与酸性染料亲合力强者,称[[嗜酸性]](acidophilia);若与两种染料的亲合力均不强者,称中性(neutrophilia)。组织的基本成分是蛋白质,构成蛋白质的[[氨基酸]]常是即有含氨基的,也有含羧基的,是[[两性电解质]]。各种蛋白质的[[等电点]]因氨基酸成分的不同而异,其电荷性质又与溶液的pH值相关,根据研究目的选用合适的染色方法,调整好染液的pH值,即可取得良好染色效果。常用的酸性染料如[[伊红]]、坚牢绿、橙黄G等,碱性染料如[[苏木精]]、亚甲蓝、[[碱性品红]]等。组织学中最常用的是苏木精(hematoxylin)和伊红(eosin)染色法,简称HE染色法。苏木精使[[细胞核]]和[[胞质]]内的嗜碱性物质着蓝紫色,伊红使[[细胞质]][[基质]]和间质内的[[胶原纤维]]等着红色。 物理吸附作用的染色方法,如用苏丹染料显示[[脂肪组织]],染料溶于脂肪内,使细胞内的脂滴显色。又如用[[硝酸银]]、氯化金等重金属盐显示细胞和组织的某些结构,则是使金属微粒附着在结构表面而呈棕黑色或棕黄色。银染法中有些组织结构可直接使硝酸银还原而显示,称此为亲银性(argentaffin);有些结构无直接还原作用,需加入[[还原剂]]方能显色,则称为嗜银性(argyrophilia)。还有些组织成分如[[结缔组织]]和[[软骨基质]]中的糖氨[[多糖]],当用[[甲苯胺蓝]](toluidine blue)等碱性染料染色后呈紫红色,这种现象称为[[异染性]](metachromasia),其原理可能是该染料在溶液中呈单体状态时显蓝色,当它与多阴离子的高分子物质耦合后,染料[[分子]]聚合成[[多聚体]]而显红色(图1-2)。还有些染色方法的原理至今还不清楚。 {{图片|gunk9n4q.jpg|异染性示意图 }} 图1-2 异染性示意图 {{Hierarchy footer}} {{组织学图书专题}}
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