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是将[[免疫学]]基本原理与[[细胞化学]]技术相结合所建立起来的新技术,根据[[抗原]]与[[抗体]]特异性结合的特点,检测细胞内某种[[多肽]]、[[蛋白质]]及膜[[表面抗原]]和[[受体]]等大分子物质的存在与分布。[[肽]]类与蛋白质种类繁多,均具有[[抗原性]],当将人或动物的某种肽或蛋白质作为抗原注入另一种动物体内,则产生与该抗原相应的[[特异性抗体]]([[免疫球蛋白]]);将抗体从[[血清]]中提出后,结合上某种[[标记物]],即成为标记抗体。用标记抗体与[[组织切片]][[标本]]孵育,抗体则与[[细胞]]中相应抗原发生特异性结合,结合部位被标记物显示,则在[[显微镜]]下观察到该肽或蛋白质的分布。用[[荧光素]](常用异硫氰酸)标记抗体,并于[[荧光显微镜]]下观察,称[[免疫荧光]]术。如抗体与[[辣根]]过氧化物酶(horse radish peroxidase, HRP)等结合,进行酶显示后,可在光镜或电镜观察,用于电镜者则称为免疫电镜术(immunoelectronmicroscopy)此外,以铁蛋 标记抗体白标记抗体,称[[铁蛋白]]标记法,也能用于电镜下观察。 ==标记抗体与抗原结合方式== 标记抗体与抗原结合方式主要有两种:①直接法:用标记抗体与抗体中的相应抗原直接结合,操作方法简便,特异性高,但敏感性较差,此法可用于[[检定]]未知抗原;②间接法:先用未标记的具有特异性的第一抗体与样品中的相应抗原结合,然后再以标记的第二抗体与特异性的第一抗体结合;第二抗体是用第一抗体作为抗原注入另一动物体内诱导产生的抗体,然后再结合以标记物。通过这样的放大作用,使抗原[[分子]]上的标记物大大增多,故间接法较直接法的敏感性大为增高,约高5~10倍,故应用更为广泛。间接法中较常用的,如[[过氧化物酶]]-抗过氧化物酶[[复合物法]](peroxidase anti-peroxidase complexmethod, 标记方法PAP法),该法除需一抗和二抗外,还需要制备HRP标记的抗酶抗体,即以HRP作为抗原[[免疫]]动物,制成抗HRP抗体,再以HRP对标记该抗体,制成稳定的环形PAP[[复合物]]。标本先后经一抗、二抗和PAP复合物处理后再以DAB显色抗原存在部位可见棕黄色产物。 ==免疫细胞化学的发展== 近10年来,[[免疫细胞]]学技术有了很大进展,各种新方法相继建立。[[单克隆抗体]] (monoclonal antibody)制备技术极大地提高抗体的特异性与免疫组化[[染色]]的精确性。继PAP法之后由于[[生物素]]-亲合素等[[试剂]]的应用,为检测微量抗原、受体、抗体提供了更精确的技术。目前常用的生物素-亲合方法有:标记亲合素-[[生物素法]](labelled avidin-biotin method LAB法)、桥连亲合素-生物素法(bridged avidin-biotin method, BAB法)及亲素-生物素-过氧化物酶复合物法(avidin-biotin-peroxidase complex method,ABC法);现市上有配制成的ABC药盒供应,使用简便,是目前广泛应用的一种方法。 [[分类:生物化学]][[分类:生物]][[分类:化学]]
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