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组织学/电子显微镜术
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{{Hierarchy header}} 1、透射电镜术 透射电镜(transmission electron microscope,TEM)是以电子束穿透样品(组织的[[超薄切片]]),经聚合放大后,显像于荧光屏上进行观察和摄片的。电镜的放大倍数的分辨率比光镜大得多,放大倍数为几万至几十万倍,分辨率可达0.2nm。[[标本]]制备较光镜的更严格,新鲜组织切成小块(lmm<sup>3</sup>),用[[戊二醛]],[[多聚甲醛]]、[[四氧化锇]]等固定,树脂包埋,以[[超薄切片机]]切成厚50~80nm的超薄切片,经[[醋酸]]铀和[[柠檬酸]]铅等重金属[[电子染色]]后,置于电镜下观察,标本在荧光屏上呈黑白反差的结构影像。被重金属浸染呈黑色的结构,称电子密度高(electron-dense);反之,浅染的部分称电子密度低(electron-lucent),这种[[染色]]称正染色(positive staining)。若被染结构着色浅淡,而其周围部分染成黑,是称为[[负染]]色(negative stainning)。透射电镜的电子枪加速电压50~100kV,电子束穿透力低,近年制成加速电压500kV以上的超高压电镜,电子束穿透力很强,可观察0.5~10μm厚的切片,可观察细胞内骨架等的立体[[超微结构]]。应用电镜观察[[细胞化学]]染色标本,称电镜细胞化学术(electron microscope cytochemistry);电镜观察[[免疫细胞化学]]染色标本,称[[免疫]]电镜术(immunoelectron microscopy);电镜与[[放射自显影]]结合的方法称电镜[[放射自显影术]](electron microscopeautoradiography)。 2、扫描电镜术 扫描电镜(scanning electron microscope,SEM)是用于观察组织表面的立体结构的。组织块经固定后,置于[[真空]]镀膜仪内于燥,在标本表面先后喷镀一层碳膜和合金膜,即可置于镜下观察。扫描电镜的景深长,样品表面的金属膜可提高其导电性和图像反差,在荧光屏上扫描[[成像]],呈现富有立体感的表面图像,如[[细胞表面]]的突起、[[微绒毛]]、[[纤毛]]及[[细胞]]的分泌与吞噬行为等(图1-13)。 {{图片|gunkbihe.jpg| [[大鼠]]分离肝[[巨噬细胞]]粘着吞噬羊[[红细胞]]扫描电镜像}} 图1-13大鼠分离肝巨噬细胞粘着吞噬羊红细胞扫描电镜像 M肝巨噬细胞,R羊红细胞 {{图片|gunkbrb0.jpg| [[冷冻蚀刻]]标本制备示意图}} 图1-14 冷冻蚀刻标本制备示意图 {{图片|gunkblbf.jpg| 细胞[[单位膜]]从中间层劈开示意图 }} 图1-15 细胞单位膜从中间层劈开示意图 3、冷冻蚀刻复型术和[[冷冻]]割断术 冷冻蚀刻复型术(tfeeze etch replica):是在透射电镜下观察组织或细胞断裂面的金属复制膜,显示细胞微细结构的立体影像。组织块先经[[甘油]][[生理盐水]]处理(防止形成冰晶)后投入液氮快速冷冻,在[[低温]]下用钢刀将样品劈开,形成凹凸不平的断裂面:-100℃真空下使断裂面的冰晶升华,暴露不平整表面;在断裂面上先后喷镀一层合金膜和碳膜,用次氯酸等组织腐蚀掉;将反差的凸凹不平的金属复型膜置于镜下观察(图1-14)。此项技术尤适用研究生物膜的内部结构,如从单位膜的[[脂质]][[分子]]疏水端劈开(图1-15),经蚀刻镀膜,镜下可见[[质膜]]断裂面复型膜结构状态(图1-16),其凹凸影像恰与实物相反。 {{图片|gunkbodz.jpg|小[[鼠肾]][[近曲小管]]微绒毛冷冻蚀刻复型电镜像 }} 图1-16小鼠肾近曲小管微绒毛冷冻蚀刻复型电镜像 ×38300 MV微绒毛 E E面,P P面([[白求恩]]医科大学尹昕、朱秀雄教授供图) 冷冻割断术(freeze cracking):是将固定组织包埋在树脂内,低温下割断,断面喷镀合金,在扫描电镜下观察断面的立体[[构型]]。该技术适于研究组织内部微细结构的相互关系,如[[肝细胞]]与[[肝血窦]]和[[胆小管]]的关系,[[肾小体]]的肾小囊与[[血管球]]的关系等(图1-17)。 {{图片|gunkbfgq.jpg|大鼠肾冷冻割断扫描电镜示肾小体 }} 图1-17 大鼠肾冷冻割断扫描电镜示肾小体 R肾小囊外表面,G血管球,T[[肾小管]] (白求恩医科大学尹昕、朱秀雄教授供图) 4、电镜X-[[射线]]显微分析术X-射线显微分析术(X-ray microanalysis)是研究细胞和组织内元素的种类、分布和含量的新技术。它是利用高速电子束轰击电镜内生物标本的微小区域,使该区所含的元素发射了一定波长的X-射线,通过检测器对X-射线进行[[波谱]]或能谱分析,即可测定微区内元素的性质、含量和分布。如测定细胞内[[Na]]、K、[[Ca]]、Fe、P、Cl等及某些[[微量元素]]的含量和分布变化,探讨各种元素与细胞生理和[[病理]]的关系。 {{Hierarchy footer}} {{组织学图书专题}}
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