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临床生物化学/固定时间法(取样法)
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{{Hierarchy header}} 前面已经提到,早期临床实验室测[[酶活性]]时常使用比色法,先让酶与[[底物]]在一定温度下作用一段固定的时间,然后停止[[酶反应]],加入[[试剂]]进行化学反应呈色测出底物和产物的变化。由于比色法灵敏度较低,或由于手工操作不易控制好,常定在30分钟左右。历史上这类方法常被命名为“终点法”、“二点法”、“固定时间法”和“取样法”。大多数文献使用“固定时间法”。此命名指出了用这类方法测酶活性浓度,必须保证酶和底物在所选定的温度下作用时间要很精确,否则将引起较大误差。但“取样法”的命名更具有特征性。因它指出此类方法和下面将提到的另一类连续监测法相比较,最基本一点的是此类方法停止反应后才测底物或物的变化。很难进行连续监测,而另一类方法则不需停止酶反应,就可测定反应物的变化,很容易观察到反应的整个过程。后一类方法开始于50年代,Warburg首先用分光光度计。在340nm处直接监测到反应物NADH的动态变化过程。由于不停止酶反应,不需添加其它呈色试剂。测定方法简单,结果准确,逐步取代了“取样法”成为目前测酶活性的主要方法。 由于经历了一个发展过程,命名比较混乱而且大部分不甚确切,IFCC建议命名为“连续监测法”,不用目前广为流行的“动态法”术语。其原因是目前测酶活性浓度方法都是基于化学反应。图17-6是一个典型的化学反应过程。 {{图片|goqr3gu8.jpg|动态和平衡概念的示意图}} 图17-6 动态和平衡概念的示意图 可以看出整个反应过程,可以大致分为二个时期。一开始为动态期,化学反应按一定速度进行,反应物浓度随时间而变化,且变化程度不断变小,到一定时间。化学反应或者达到平衡,或者反应达到终点,此时反应速度为零,反应物浓度不变。最近IFCC文件按所用方法所测定的反应是在达到平衡前还是平衡后。分别命名为动态法或平衡法。一般文献往往将后一类方法称为终点法。 {{Hierarchy footer}} {{临床生物化学图书专题}}
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