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<b>1,[[反转录酶]]</b>(Reverse transcriptase)是以RNA为模板指导三磷酸[[脱氧核苷]]酸合成互补DNA(cDNA)的酶。哺乳类C型[[病毒]]的反转录酶和鼠类B型病毒的反转录酶都是一条[[多肽]]链。鸟类RNA病毒的反转录酶则由两上[[亚基]]结构。[[真核生物]]中也都分离出具有不同结构的反转录酶。这种酶需要镁离子或锰离子作为辅助因子,当以mRNA为模板时,先合成[[单链]]DNA(ssDNA),再在<b>反转录酶</b>和DNA[[聚合酶]]Ⅰ作用下,以单链DNA为模板合成“发夹”型的双链DNA(dsDNA),再由[[核酸酶]]S1切成二条单链的双链DNA。因此,反转录酶可用来把任何[[基因]]的mRNA[[反转录]]成cDNA拷贝,然后可大量[[扩增]]插入载体后的cDNA。也可用来标记cDNA作为[[放射性]]的[[分子]][[探针]]。 <b>2,反转录酶具有的[[酶活性]](三种酶活性) </b>大多数反转录酶都具有多种酶活性,主要包括以下几种活性。①DNA聚合酶活性;以RNA为模板,[[催化]]dNTP聚合成DNA的过程。此酶需要RNA为[[引物]],多为[[色氨酸]]的tRNA,在引物tRNA3′-末端以5′→3′方向合成DNA。反转录酶中不具有3′→5′外切酶活性,因此没有校正功能,所以由反转录酶催化合成的DNA出错率比较高。②RNase H活性;由反转录酶催化合成的cDNA与模板RNA形成的杂交分子,将由RNase H从RNA5′端水解掉RNA分子。③DNA指导的DNA聚合酶活性;以反转录合成的第一条DNA单链为模板,以dNTP为[[底物]],再合成第二条DNA分子。除此之外,有些反转录酶还有DNA[[内切酶]]活性,这可能与[[病毒基因]]整合到[[宿主]][[细胞]][[染色体]]DNA中有关。反转录酶的发现对于[[遗传工程]]技术起了很大的推动作用,目前它已成为一种重要的工具酶。用组织细胞提取mRNA并以它为模板,在反转录酶的作用下,合成出互补的DNA(cDNA),由此可构建出cDNA文库(cDNA library),从中筛选特异的目的基因,这是在[[基因工程]]技术中最常用的获得目的基因的方法。 <b>3,反转录酶的作用过程:</b>反转录酶的作用是以dNTP为底物,以RNA为模板,tRNA(主要是色氨酸tRNA)为引物,在tRNA3′桹H末端上,按5′→3′方向,合成一条与RNA模板互补的DNA单链,这条DNA单链叫做互补DNA(complementary DNA, cDNA),它与RNA模板形成RNA桪NA杂交体。随后又在反转录酶的作用下,水解掉RNA链,再以cDNA为模板合成第二条DNA链。至此,完成由RNA指导的DNA合成过程。 <b>4,反转录酶的发现</b><b>:</b>1970年Temin等在致癌RNA病毒中发现了一种特殊的DNA聚合酶,该酶以RNA为核板,根据[[碱基配对]]原则,按照RNA的[[核苷酸]]顺序(其中V与A配对)合成DNA。这一过程与一般[[遗传信息]]流转录的方向相反,故称为反转录,催化此过程的DNA聚合酶叫做反转录酶(reverse transcriptase)。后来发现反转录酶不仅普遍存在于RNA病毒中,哺乳动物的[[胚胎细胞]]和正在分裂的[[淋巴细胞]]中也有反转录酶。 [[分类:生物化学]][[分类:生物]][[分类:化学]][[分类:基因]]
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