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临床生物化学/样品预处理
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{{Hierarchy header}} TDM工作中,除少数方法可直接应用收集的[[标本]]供测定外,大多需进行必要的[[预处理]]。预处理的目的是在不破坏欲测定药物的[[化学]]结构的前提下,用适当的方法尽量减少干扰组分,浓缩[[纯化]]待测物,以提高检测的灵敏度及特异性,并减少对仪器的损害。预处理包括去[[蛋白]]、提取和化学衍生化。 (一)去蛋白 TDM常用的[[血清]](浆)、[[唾液]]或尿液等都或多或少地含有[[蛋白质]],并对多种测定方法构成干扰,还可造成仪器污染、损害。去蛋白的方法有沉淀离心法、层[[析法]]、[[超滤]]法和[[超速离心法]]等。其中以沉淀离心法最为简便快捷,并且结合提取的要求,选用合适的酸、碱和有机溶剂,与提取同步进行,故最常选用。由于药物和[[血浆蛋白]]的结合,大多是通过离子键、氢键、VanderWaals引力等较弱的作用力形成。当使蛋白质变性沉淀时,这种结合也同时被破坏,释放出药物,因此用沉淀离心法去蛋白处理的体液标本,最后测得的[[药物浓度]]应是包括游离药物和与蛋白结合的药物两部分的总浓度。显然,若需要单独测定游离药物浓度时,不能采用此法,而应选用温和但较繁杂、耗时的层析法、超滤法或超速离心法。这样既可去除蛋白,又不至使蛋白结合的药物释出。 (二)提取 为了尽可能选择性地浓缩待测组分,以提高检测的灵敏度,并改善检测方法的特异性,减少干扰,除[[免疫化学]]法外,TDM使用的多数检测方法均需进行提取。提取方法有液-液提取和液-固提取两种。 ⒈液-液提取由于大多数药物都是有机化合物,并有不少为[[弱酸]]、[[弱碱]]。它们在pH不同的溶液中,将发生程度不等的[[解离]]。因此,应选用对待测物溶解度高、与所用标本不相混溶也不发生[[乳化]]的有机溶剂,并根据待测物的酸碱性和pK<sub>a</sub>,酸化或[[碱化]]样本,使待测物尽可能多地以脂溶性高的[[分子]]态存在,从而主要分配到有机溶剂中。这样处理,可使在此条件下极性高的干扰成分被排除。离心分离有机相和水相(样本),即可达到提取的目的。若必要,可按上述原理将待测成分再转提到pH适当的水相中,进一步排除高脂溶性的干扰物质。这类方法由于样本和提取介质均为液相,故称液-液提取。 ⒉液-固提取又称固相柱提取,是近年发展的一种提取方法。可根据待测物的理化性质选用一合适的常压短色谱柱,TDM中常用疏水性填料柱。待标本(多经去蛋白处理)通过该柱后,以适当强度的溶剂洗脱,选择性收集含待测组分的[[洗脱液]]部分,即可达到较理想的提取目的。也可用强度不同的溶剂分次洗脱,仅收集洗脱待测组分。此类提取柱已有数种商品化生产,可供选用。本法虽比液-液提取繁琐,但回收率及提取特异性均高是其优点。 (三)化学衍生化反应 用光谱法和[[色谱法]]检测药物时,可根据待测物的化学结构和检测方法的要求,通过化学衍生化反应,特异性地引入显色(可见光分光法)、发光(紫外、荧光、磷光)基团,提高检测的灵敏度和特异性。[[气相层析]]时,常需使待测物硅烷化、烷化、卤化和[[酰化]]等,以增加待测物的热稳定性和[[挥发性]],改善分离效果和适用于特殊的检测器。用高效液相色谱柱前衍生化分离测定手性[[异构体]]药物,则需在待测物中引入手性拆分基团。 {{Hierarchy footer}} {{临床生物化学图书专题}}
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