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临床生物化学/层析技术的原理和分类
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{{Hierarchy header}} (一)层析技术的原理 层[[析法]]是目前广泛应用的一种分离技术。本世纪初俄国植物学家M.Tswett发现并使用这一技术证明了植物的叶子中不仅有[[叶绿素]]还含有其它色素。现在层析法已成为生物化学、[[分子]][[生物学]]及其它学科领域有效的分离分析工具之一。 层析法是利用不同物质理化性质的差异而建立起来的技术。所有的层析系统都由两个相组成:一是固定相,它或者是固体物质或者是固定于固体物质上的成分;另一是流动相,即可以流动的物质,如水和各种溶媒。当待分离的混合物随溶媒(流动相)通过固定相时,由于各组份的理化性质存在差异,与两相发生相互作用(吸附、溶解、结合等)的能力不同,在两相中的分配(含量对比)不同,而且随溶媒向前移动,各组份不断地在两相中进行再分配。与固定相相互作用力越弱的组份,随流动相移动时受到的阻滞作用小,向前移动的速度快。反之,与固定相相互作用越强的组份,向前移动速度越慢。分部收集流出液,可得到样品中所含的各单一组份,从而达到将各组份分离的目的。 (二)层析法分类见表16-5~7 (三)层析法的特点与应用 表16-5 按两相所处状态分类 {| class="wikitable" | rowspan="2" colspan="2" | | colspan="2" | 流动相 |- | 液体 | 气体 |- | | 液体 | 液-液层析法 | 气-液层析法 |- | 固定相 | colspan="3" | |- | | 固体 | 液-固层析法 | 气-固层析法 |} 层析法是根据物质的理化性质不同而建立的分离分析方法。根据层析峰的位置及峰高或峰面积,可以定性及定量。层析法与光学、电学或[[电化学]]仪器连用,可检测出层析后各组份的浓度或质量,同时绘出层析图。层析仪与电子计算机联用,可使操作及数据处理自动化,大大缩短分析时间。由于层析法具有分辨率高、灵敏度高、选择性好、速度快等特点,因此适用于杂质多、含量少的复杂样品分析,尤其适用于[[生物]]样品的分离分析。近年来,已成为生物化学及分子生物学常用的分析方法。在医药卫生、环境[[化学]]、高分子材料、石油化工等方面也得到了广泛的应用。 表16-6 按层析原理分类 {| class="wikitable" | 名称 | 分离原理 |- | [[吸附层析]]法 | 组份在[[吸附剂]]表面吸附固定相是固体吸附剂,各能力不同 |- | 分配层析法 | 各组份在流动相和静止液相(固相)中的分配系数不同 |- | 离子交换层析法 | 固定相是离子交换剂,各组份与离子交换剂亲和力不同 |- | [[凝胶层析]]法 | 固定相是多孔[[凝胶]],各组份的分子大小不同,因而在凝胶上受阻滞的程度不同 |- | 亲和层析法 | 固定相只能与一种待分离组份专一结合,以此和无亲和力的其它组份分离 |} 表16-7 按操作形式不同分类 {| class="wikitable" | 名称 | 操作形式 |- | [[柱层析]]法 | 固定相装于柱内,使样品沿着一个向前移而达分离 |- | [[薄层层析法]] | 将适当粘度的固定相均匀涂铺在薄板上,点样后用流动相展开,使各组份分离 |- | 纸层析法 | 用滤纸作液体的载体,点样后用流动相展开,使各组份分离 |- | 薄膜层析法 | 将适当的高分子有机吸附剂制成薄膜,以类似纸层析方法进行物质的分离 |} {{Hierarchy footer}} {{临床生物化学图书专题}}
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